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對(duì)電泳儀的一些誤差來(lái)源分析
點(diǎn)擊次數(shù):2742 更新時(shí)間:2022-11-25
電泳是指帶電荷的溶質(zhì)或粒子在電場(chǎng)中向著與其本身所帶電荷相反的電極移動(dòng)的現(xiàn)象。利用電泳現(xiàn)象將多組分物質(zhì)分離、分析的技術(shù)叫做電泳技術(shù)??梢詫?shí)現(xiàn)電泳分離技術(shù)的儀器稱之為電泳儀。
凝膠電泳是分子生物學(xué)中用于DNA分析的主要方法之一。此方法涉及DNA片段通過(guò)凝膠的遷移,在凝膠中它們根據(jù)大小或形狀分開(kāi)。但是,即使是科學(xué)上合理的方法,例如凝膠電泳,也無(wú)法避免產(chǎn)生誤差,對(duì)于誤差的常見(jiàn)因素如下:
1.樣品污染
電泳法的主要應(yīng)用是在分子生物學(xué)中分析DNA的工具,但在法醫(yī)學(xué)中也用作鑒定違法現(xiàn)場(chǎng)樣本的手段。為了獲得準(zhǔn)確的結(jié)果,小化此技術(shù)中的錯(cuò)誤來(lái)源很重要。錯(cuò)誤的來(lái)源之一是DNA樣品的污染。如果樣品中有外源DNA,則凝膠中的條帶比僅包含純化樣品的凝膠中的帶多。
2.凝膠、電流和緩沖液?jiǎn)栴}
電源穩(wěn)壓器用于保持凝膠電泳中的電壓穩(wěn)定。凝膠的濃度也必須正確以避免錯(cuò)誤。如果濃度太高或太低,碎片將遷移得太慢或太快。這將導(dǎo)致解析不同頻段時(shí)出現(xiàn)錯(cuò)誤。在電泳過(guò)程中,必須注意確保電壓穩(wěn)定。電壓的任何波動(dòng)都將導(dǎo)致DNA片段不穩(wěn)定遷移,從而導(dǎo)致條帶讀取錯(cuò)誤。緩沖溶液還必須具有正確的組成,因?yàn)榫哂绣e(cuò)誤pH或離子濃度的緩沖液會(huì)改變DNA片段的形狀,并改變其遷移時(shí)間。
3.正確的可視化
可視化凝膠中的每個(gè)條帶代表一組大小相同的DNA片段。重要的是凝膠必須正確可視化。如果用于可視化樣品的染料或放射性探針的濃度太高,則生成的圖像將非?;靵y,因?yàn)闅埩羲槠矊⒖梢暬?。如果凝膠濃度太低,將無(wú)法可視化。在所有階段都遵循正確的過(guò)程后,凝膠電泳儀將得出準(zhǔn)確且可以放心使用的結(jié)果。